Сифилис - Лечение кожи

ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

  1. молочница у обоих партнеров
  2. отличие герпеса от сифилиса
  3. аллергия на касторовое масло

Ошибочные результаты

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

  1. 1Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
  2. 2Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
  3. 3Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

  1. 1Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
  2. 2Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
  3. 3ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
  4. 4ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

  1. 1Нетрепонемные тесты:
    • Реакция Вассермана (РСК);
    • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
    • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
    • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
    • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней — VDRL.
  2. 2Трепонемные тесты:
    • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
    • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
    • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
    • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
    • Иммуноблоттинг.
Алгоритм серодиагностики сифилиса

Рисунок 1 — Алгоритм серодиагностики сифилиса

ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Расшифровка результатов серологических реакций на сифилис

Таблица 1 — Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. 1Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. 2Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. 3Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. 4Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. 5Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм сифилиса, а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

  • IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
  • IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
  • IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования.

Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

За свою жизнь человек очень часто проходит проверку на сифилис. В случае положительного результата многие впадают в панику. Однако не стоит этого делать, потому что есть вероятность ошибки. В такой ситуации необходимо начать подготовку к повторному анализу.

Общие характеристики трепонемных тестов

При проведении диагностических тестов на сифилис, применяются различные 

серологические реакции

: агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценции, связывания комплемента, иммуноферментный анализ и др. В основе всех этих серологических реакций лежит взаимодействие 

антигенов и антител

Специфические серологические тесты называются трепонемными потому, что в этих тестах используются бледные трепонемы или их антигены, то есть антигены трепонемного происхождения. Цель трепонемных тестов — выявление специфических антител к антигенным структурам возбудителя сифилиса, то есть антител, направленные конкретно против самих бактерий T.

Как и в 

нетрепонемных тестах

, при проведении трепонемных тестов используется реакция «антиген-антитело». Для проведения и обнаружения результатов реакции «антиген-антитело» используют более сложные и дорогие методы, чем в случае нетрепонемных тестов.

ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

Своевременное и качественное распознавание сифилитической инфекции связывается в настоящее время с широким внедрением трепонемных тестов. 

Трепонемные тесты используют, чтобы подтвердить наличие сифилиса — с их помощью проверяют результаты нетрепонемных тестов, что особенно необходимо при диагностике 

скрытых форм сифилиса

. Трепонемные тесты также применяются для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда нетрепонемные 

кардиолипиновые тесты

 (реакция Вассермана, реакция микропреципитации и др.) отрицательные. 

Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности, т.к. трепонемные реакции у некоторых больных могут оставаться положительными в течение многих лет после полноценного лечения сифилиса.

Однако, при проведении трепонемных тестов, в небольшом числе исследований могут встречаться 

ложноположительные результаты

, особенно при наличии у пациента таких заболеваний, как инфекционный мононуклеоз, болезни соедининтельной ткани, лепра или инъекционная наркомания. 

По клинической специфичности трепонемные тесты сопоставимы с нетрепонемными, по клинической чувствительности – превосходят их.

На сегодняшний день предложено более 20 вариантов трепонемных специфических серологических тестов. При их проведении, в качестве антигена используют целые клетки или отдельные 

ПОДРОБНЕЕ:  Сифилис на члене

антигены T. pallidum

 штамма Nichols из яичка кролика, культуральные трепонемы или рекомбинантные белки бледной трепонемы. 

При постановке трепонемных тестов применяются различные виды антигенов

  • живые или фиксированные  трепонемы; 
  • очищенные и обработанные ультразвуком трепонемы (соникат). Используются культуральные или (редко) патогенные штаммы T. Pallidum; 
  • специфические для T. pallidum биосинтетические или рекомбинантные антигены.
  • Применяется антиген трепонемного происхождения: используются либо подготовленные трепонемы, либо рекомбинантные белки – антигены возбудителя;
  • В тестах определяются трепонемоспецифические антитела
  • Методы — диагностические, подтверждающие, «золотой стандарт»
  • Высокая чувствительность: чувствительность трепонемных тестов составляет от 70 до 100% в зависимости от вида теста и стадии сифилиса;
  • Высокая специфичность: специфичность трепонемных тестов составляет 94 – 100%;
  • Ложноположительные реакции при трепонемных тестах отмечаются реже, чем при нетрепонемных;
  • «Надежность» при диагностике поздних форм сифилиса
  • Проведение скрининга населения (используются методы ИФА, РПГА, простые быстрые тесты). Скрининг отдельных категорий населения на сифилис (доноров, беременных, больных офтальмологических, психоневрологических, кардиологических стационаров, ВИЧ-инфицированных).
  • Подтверждение положительных результатов нетрепонемных тестов
  • Тесты применяются для исключения ложноположительных результатов (ЛПР), ретроспективного подтверждения диагноза
  • Подтверждение в случае расхождения результатов скринингового трепонемного теста и последующего нетрепонемного теста, а также скринингового и подтверждающего трепонемных тестов;
  • трепонемные тесты не могут быть использованы для контроля эффективности терапии, т. к. антитрепонемные антитела длительно циркулируют в организме больного, перенесшего сифилитическую инфекцию;
  • дают положительные результаты при невенерических трепонематозах и спирохетозах (боррелиоз, пинта, фрамбезия, беджель);
  • могут давать ложноположительные реакции у больных с аутоиммунными заболеваниями, проказой, онкопатологией, эндокринной патологией и при некоторых других заболеваниях.
  • трепонемные тесты дороже для проведения в расчете на одного больного, чем нетрепонемные тесты, поэтому возрастают затраты при проведении скрининговых обследований на сифилис

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Темнопольная микроскопия как метод визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале

Рисунок 2 — Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации — CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro).

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

Трепонемные тесты на сифилис. Виды серологических реакций.

  • Реакция связывания комплемента (реакция Вассермана) с трепонемным антигеном (РСКт).
  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ; Fluorescent treponemal antibody, FTA). Она применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс (FTA-abs; FTA-abs double staining; FTA-abs IgM; РИФ-абс-IgM; 19S-IgM-FTA-abs); РИФц — реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью.
  • Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА; Treponema pallidum haemagglutination assay, TPHA).
  • Реакция пассивной агглютинации желатиновых частиц, сенсибилизированных антигенами возбудителя сифилиса (TPPA, Treponema pallidum particle agglutination assay)
  • Иммуноферментный анализ (ИФА; Enzyme Lynced Immunosorbent Assay, ELISA).
  • ИХЛ — иммунохемилюминесцентное исследование (ИХЛ; Chemiluminescence immunoassays, CLIA)
  • Реакция иммобилизации бледных трепонем РИБТ (РИТ), в зарубежной литературе TPI (Treponema pallidum immobilization test). В последние годы используется все реже и только в научных целях и в исследовательских лабораториях.
  • Иммуноблотинг (ИБ; Western Blot, Line Blot). Как правило, используется метод линейного иммуноблотинга, являющийся вариантом иммуноферментного анализа. Применяется в двух вариантах: для выявления IgG и IgM-антител к возбудителю сифилиса 

64684486486

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела классов IgM, IgG и суммарные имеют универсальное значение и применяются как для скрининга, так и для подтверждения диагноза.

Эти методики просты и доступны в проведении, имеют высокую воспроизводимость, автоматизированы. При применении ИФА или РПГА обязательным условием является использование в повторном анализе той же тест-системы, что и при первичном обследовании.

РИФ (fluorescent treponemal antibody, FTA) основана на визуализации при люминесцентной микроскопии комплексов антигенов с антителами с помощью сыворотки против Ig человека, меченной флюорохромом.

Методы РИФ, ИФА, иммуноблоттинг (ИБ) позволяют выявить специфические антитела к антигенам T. pallidum (при сифилисе результаты тестов становятся положительными) с 3-й недели от момента заражения и ранее, РПГА и РИБТ – с 7–8-й недели.

Из наиболее распространенных специфических трепонемных тестов в мировой практике, в которых используется реакция агглютинации, можно перечислить следующие. В РПГА (Treponema pallidum hemagglutination assay, ТРНА),  реакции микрогемагглютинации (microhemagglutination assay for Treponema pallidum, MHA-TP) при положительном результате происходит агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных (обработанных) трепонемным антигеном, в присутствии антитрепонемных антител.

Использование в качестве носителя латекса или желатиновых частиц в тесте ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination) позволяет применять нагрузочный тест в случае лизиса эритроцитов (распада эритроцитов из-за разрушения их мембраны) сыворотками некоторых больных, а также придает стабильность реагентам.

ПОДРОБНЕЕ:  Обнаружено новое объяснение возрастного женского бесплодия

Трепонемные тесты

Антиген Улавливающая система Тест

Живые патогенные трепонемы

Взвесь живых трепонем

РИТ, РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем)

Интактные трепонемы Трепонемы, фиксированные на стеклах

РИФ (реакция иммунофлуоресценции), РИФ-абс (РИФ с абсорбцией), РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца и т.п.

Очищенные и разрушенные ультразвуком трепонемы Связаны с эритроцитами РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)
Связаны с желатиновыми частицами Реакция агглютинации частиц (TPPA)
Связаны с поверхностью лунок микропланшета ИФА

Белки, разделенные методом электрофореза в полиакриламидном геле и перенесенные на мембраны методом вестерн-блоттинга

Иммуноблоттинг
Рекомбинантные Связаны с поверхностью лунок микропланшета Рекомбинантный ИФА

Белки, разделенные методом электрофореза в полиакриламидном геле и перенесенные на мембраны методом вестерн-блоттинга

Иммуноблотинг с рекомбинантными АГ
Связаны с частицами латекса Латекс-агглютинация

КСР — это комплекс реакций, применяемых для серодиагностики сифилиса в качестве стандартного метода. Этот комплекс реакций включает в себя реакцию Вассермана с кардиолипиновым антигеном (экстракт из сердца быка, обогащенный лецитином и холестерином) и трепонемным антигеном (обработанная ультразвуком взвесь апатогенных культуральных бледных трепонем ), а также микрореакцию преципитации (РМП) с плазмой или инактивированной сывороткой, которая ставится с кардиолипиновым антигеном

КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60- 70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

РСКт — Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (Реакция Вассермана)

ИФА-анализ крови: метод, диагностика на ВИЧ, сифилис

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

титрование крови

Недостатки:

  1. 1Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. 2Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. 3Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. 4Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

  1. 1Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. 2Получение быстрого ответа;
  3. 3Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. 1Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. 2Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. 3Злокачественные новообразования.
  4. 4Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. 5Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. 6Беременность.
  7. 7Употребление алкоголя.
  8. 8Приём жирной пищи.
  9. 9Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно  причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

Можно ли снизить антитела к трепонеме?

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ; Treponema pallidum immobilization test, TPI) — классический метод, который служит для выявления специфических трепонемных антител. Реакция РИБТ использует в качестве антигена патогенные бледные трепонемы T.

pallidum (штамм Nichols), выращенные в яичке кролика. РИБТ основывается на потере подвижности живых бледных трепонем после воздействия антител из сыворотки крови пациента и комплемента. Результаты оцениваются посредством темнопольной микроскопии.

Несмотря на то, что тест РИБТ был введен в клиническую практику в качестве специфического теста на сифилис, он является трудоемким, технически сложным, времязатратным и дорогим в применении.

Антитела, продуцируемые в ответ на проникновение патогенного возбудителя в организм, у многих пациентов присутствуют в крови в течение длительного периода и обнаруживаются при регулярном обследовании, что доставляет немалый дискомфорт при получении лабораторных результатов.

После длительной терапии антибактериальными препаратами количество антител в крови начинает заметно уменьшаться. Это означает, что защитные тельца образуются в меньших количествах, но полностью они не исчезают. Врачи утверждают, что убрать их все невозможно.

Методика, в ходе которой используется реакция Вассермана, не показывает присутствующие антитела к сифилису после полного курса терапии и уничтожения бледной трепонемы в организме. У большинства пациентов, прошедших эффективное лечение сифилиса результаты RW-анализа отрицательны, и показатели крови — норма.

Иммуноглобулины класса М исчезают спустя полгода после терапии заболевания, выявленного на начальном этапе. После лечения сифилиса поздней стадии они пропадают через год. При отсутствии врачебных мер эти антитела уменьшаются через 1,5 года, что не означает улучшение состояния больного.

ПОДРОБНЕЕ:  В мазке обнаружена молочница - Все про молочницу

Как правило, запущенные формы сифилиса сопровождаются усугублением патологических процессов, связанных с нарушением работы внутренних органов и систем. При отсутствии терапии сифилис ведет к потере работоспособности и затем к смерти.

Иммуноглобулины класса G циркулируют в крови много лет. У некоторых пациентов – всю жизнь. Такое явление носит название «серологический шрам».

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Реакция микропреципитации (схема)

Рисунок 2 — Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

РПГА-реакция пассивной гемагглютинации

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) является распространенным серологическим тестом, прочно укоренившимся в лабораторной практике.  обладает достаточно высоким уровнем эффективности при исследовании.

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Рисунок 3 — Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

ИФА — Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы.

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Рисунок 4 — Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

ложноположительный результат

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

Иммуноферментный анализ (ИФА; The enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) является одним из многочисленных методов серологической диагностики инфекционных заболеваний. Иммуноферментный анализ (ИФА) в серодиагностике сифилиса — это тест на антитела классов M, G и A (IgM, IgG, IgA) против антигенов бледной трепонемы. Возможна постановка ИФА с ликвором.

Внедрение в практику иммуноферментного анализа (ИФА) вместо реакции Вассермана и других кардиолипиновых тестов значительно повысило качество лабораторной диагностики сифилиса. Существенным преимуществом данного метода является возможность автоматизации процесса исследования, что позволяет снизить влияние человеческого фактора.

Анализ на ВИЧ, пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков.

Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций, предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным.

5468468684648

Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок.

Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

  1. Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
  2. Повторный ( ) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
  3. Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
  4. Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

  1. морозит и голова кружится
  2. повышение соэ при молочнице
  3. отделение неврозов
  4. после леса болит голова
  5. мексидол шум в ушах
  6. болит голова после подтягиваний
  7. молочница от грязных рук
Adblock
detector