Сифилис - Лечение кожи

Сифилис рпга 4

  1. левая сторона лба болит
  2. мазок после лечения молочницы
  3. дифлюкан через сколько действует

Трепонемные тесты на сифилис. Виды серологических реакций.

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

  1. 1Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
  2. 2Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
  3. 3Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

  1. 1Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
  2. 2Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
  3. 3ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
  4. 4ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

Серологические реакции — это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

  1. 1Нетрепонемные тесты:
    • Реакция Вассермана (РСК);
    • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
    • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
    • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
    • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней — VDRL.
  2. 2Трепонемные тесты:
    • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
    • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
    • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
    • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
    • Иммуноблоттинг.
Алгоритм серодиагностики сифилиса

Рисунок 1 — Алгоритм серодиагностики сифилиса

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

Сифилис рпга 4

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro).

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Расшифровка результатов серологических реакций на сифилис

Таблица 1 — Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Сифилис рпга 4

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. 1Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. 2Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. 3Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. 4Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. 5Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

При проведении диагностических тестов на сифилис, применяются различные 

серологические реакции

: агглютинации, преципитации, иммунофлюоресценции, связывания комплемента, иммуноферментный анализ и др. В основе всех этих серологических реакций лежит взаимодействие 

антигенов и антител

Специфические серологические тесты называются трепонемными потому, что в этих тестах используются бледные трепонемы или их антигены, то есть антигены трепонемного происхождения. Цель трепонемных тестов — выявление специфических антител к антигенным структурам возбудителя сифилиса, то есть антител, направленные конкретно против самих бактерий T.

Как и в 

нетрепонемных тестах

, при проведении трепонемных тестов используется реакция «антиген-антитело». Для проведения и обнаружения результатов реакции «антиген-антитело» используют более сложные и дорогие методы, чем в случае нетрепонемных тестов.

Своевременное и качественное распознавание сифилитической инфекции связывается в настоящее время с широким внедрением трепонемных тестов. 

Трепонемные тесты используют, чтобы подтвердить наличие сифилиса — с их помощью проверяют результаты нетрепонемных тестов, что особенно необходимо при диагностике 

скрытых форм сифилиса

. Трепонемные тесты также применяются для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда нетрепонемные 

кардиолипиновые тесты

 (реакция Вассермана, реакция микропреципитации и др.) отрицательные. 

Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности, т.к. трепонемные реакции у некоторых больных могут оставаться положительными в течение многих лет после полноценного лечения сифилиса.

Однако, при проведении трепонемных тестов, в небольшом числе исследований могут встречаться 

ложноположительные результаты

, особенно при наличии у пациента таких заболеваний, как инфекционный мононуклеоз, болезни соедининтельной ткани, лепра или инъекционная наркомания. 

По клинической специфичности трепонемные тесты сопоставимы с нетрепонемными, по клинической чувствительности – превосходят их.

  • Реакция связывания комплемента (реакция Вассермана) с трепонемным антигеном (РСКт).
  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ; Fluorescent treponemal antibody, FTA). Она применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс (FTA-abs; FTA-abs double staining; FTA-abs IgM; РИФ-абс-IgM; 19S-IgM-FTA-abs); РИФц — реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью.
  • Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА; Treponema pallidum haemagglutination assay, TPHA).
  • Реакция пассивной агглютинации желатиновых частиц, сенсибилизированных антигенами возбудителя сифилиса (TPPA, Treponema pallidum particle agglutination assay)
  • Иммуноферментный анализ (ИФА; Enzyme Lynced Immunosorbent Assay, ELISA).
  • ИХЛ — иммунохемилюминесцентное исследование (ИХЛ; Chemiluminescence immunoassays, CLIA)
  • Реакция иммобилизации бледных трепонем РИБТ (РИТ), в зарубежной литературе TPI (Treponema pallidum immobilization test). В последние годы используется все реже и только в научных целях и в исследовательских лабораториях.
  • Иммуноблотинг (ИБ; Western Blot, Line Blot). Как правило, используется метод линейного иммуноблотинга, являющийся вариантом иммуноферментного анализа. Применяется в двух вариантах: для выявления IgG и IgM-антител к возбудителю сифилиса 

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела классов IgM, IgG и суммарные имеют универсальное значение и применяются как для скрининга, так и для подтверждения диагноза.

Эти методики просты и доступны в проведении, имеют высокую воспроизводимость, автоматизированы. При применении ИФА или РПГА обязательным условием является использование в повторном анализе той же тест-системы, что и при первичном обследовании.

ПОДРОБНЕЕ:  Вторичный сифилис - фото сифилиса на второй стадии

РИФ (fluorescent treponemal antibody, FTA) основана на визуализации при люминесцентной микроскопии комплексов антигенов с антителами с помощью сыворотки против Ig человека, меченной флюорохромом.

Методы РИФ, ИФА, иммуноблоттинг (ИБ) позволяют выявить специфические антитела к антигенам T. pallidum (при сифилисе результаты тестов становятся положительными) с 3-й недели от момента заражения и ранее, РПГА и РИБТ – с 7–8-й недели.

Из наиболее распространенных специфических трепонемных тестов в мировой практике, в которых используется реакция агглютинации, можно перечислить следующие. В РПГА (Treponema pallidum hemagglutination assay, ТРНА),  реакции микрогемагглютинации (microhemagglutination assay for Treponema pallidum, MHA-TP) при положительном результате происходит агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных (обработанных) трепонемным антигеном, в присутствии антитрепонемных антител.

Использование в качестве носителя латекса или желатиновых частиц в тесте ТРРА (Treponema pallidum particle agglutination) позволяет применять нагрузочный тест в случае лизиса эритроцитов (распада эритроцитов из-за разрушения их мембраны) сыворотками некоторых больных, а также придает стабильность реагентам.

Альтернативы анализа РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Сифилис рпга 4

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Рисунок 3 — Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы.

кровь на сифилис в лунках

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Рисунок 4 — Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) является распространенным серологическим тестом, прочно укоренившимся в лабораторной практике.  обладает достаточно высоким уровнем эффективности при исследовании.

Иммуноферментный анализ (ИФА; The enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) является одним из многочисленных методов серологической диагностики инфекционных заболеваний. Иммуноферментный анализ (ИФА) в серодиагностике сифилиса — это тест на антитела классов M, G и A (IgM, IgG, IgA) против антигенов бледной трепонемы. Возможна постановка ИФА с ликвором.

Внедрение в практику иммуноферментного анализа (ИФА) вместо реакции Вассермана и других кардиолипиновых тестов значительно повысило качество лабораторной диагностики сифилиса. Существенным преимуществом данного метода является возможность автоматизации процесса исследования, что позволяет снизить влияние человеческого фактора.

С развитием лабораторной диагностики в условиях модернизации здравоохранения РФ в практику лабораторий вошла автоматизация лабораторных исследований, которая позволяет стандартизовать аналитические этапы исследований.

Это способствует повышению качества диагностики. С внедрением автоматизации стали применяться новые высокотехнологичные методы, обладающие высокой чувствительностью и специфичностью, такие как иммунохемилюминесцентный анализ (ИХА) (chemiluminescence immunoassay — CLIA)

Хемилюминесценция — процесс излучения фотонов при переходе электронно-возбужденных продуктов окислительных химических реакций в исходное энергетическое состояние. В ходе реакции хемилюминесценции выделяется значительное количество энергии, и квантовый выход излучаемого света достаточно высок. Из всех неизотопных методов хемилюминесценция обеспечивает наиболее высокую чувствительность. Для иммунометрических методов чувствительность хемилюминесценции на порядки превосходит чувствительность радиоиммуноанализа. 

Метод иммунохемилюминесценции (ИХЛ) в настоящее время нашел свое применение при диагностике маркеров опухолей, аутоиммунных заболеваний, диабета, кардиомаркеров, гормонов (щитовидной железы, надпочечников, женских и мужских половых гормонов), torch-инфекций, вирусных гепатитов, вирусов группы герпеса. 

На основе метода иммунохемилюминесценции разработан ряд высокочувствительных и специфичных (98—100%) тест-систем для диагностики сифилиса, применяемых в основном за рубежом.

В методе в качестве антигенов используются полученные генно-инженерными методами рекомбинантные липопротеины, которые являются полными аналогами антигенов T.pallidum.

Метод ИХА по результатам клинического исследования получил признание и рекомендован к применению в лабораторной диагностике сифилиса в Российской Федерации в качестве скринингового и подтверждающего теста при наличии в лабораториях соответствующего оборудования. В 2012 г.

ИХА был включен в качестве скринингового и подтверждающего теста для диагностики сифилиса в Клинические рекомендации по ведению больных с инфекциями, передаваемыми половым путем, и урогенитальными инфекциями

  • исключение влияния субъективных факторов на аналитическом этапе исследования 
  • безопасность персонала при выполнении исследований потенциально инфицированного биологического материала
  • повышение скорости получения результатов пациентом
  • стандартизацию исследований и контроль качества исследования 
  • выдачу надежных достоверных результатов пациентам
  • высокое качество клинических лабораторных исследований.

По чувствительности метод ИХА сопоставим с методом радиоиммунного анализа, а по простоте исполнения, безопасности для персонала и многим другим параметрам – превосходит его. 

Метод ИХА, обладающий высокой чувствительностью и специфичностью (98–100%), дает возможность количественного определения уровня антител к возбудителю сифилиса, может быть использован для подтверждения сифилитической инфекции и скрининга. Ограничения применения: не может быть использован для контроля эффективности терапии, может давать ложноположительный результат.

РПГА расшифровывается, как реакция пассивной гемагглютинации.

После соединения сыворотки заражённого сифилисом к реагенту РПГА протекает агглютинация (присоединение или склеивание) эритроцитов и их выпадение в осадок. Степень склеивания зависит напрямую от скопления и плотности антител в сыворотке крови, по этой причине РПГА помогает не только выявить наличие антител, но и опознать их количество.

Подразделяют результат на первичное и вторичное инфицирование, выражающееся в проявлении различных антител. При первичном активизируются IgM, при вторичном – IgG. Точность исследования ко второй фазе становится ещё более специфичной. Если на первой фазе она составляет около 96%, то на второй может доходить до 99%.

Анализ хорош в качестве самостоятельного исследования, но лучше употреблять его в качестве подтверждающего метода после положительного неспецифического исследования.

Благодаря своей высокой точности данный анализ всё чаще применяется для подтверждения или опровержения начала поражения больного сифилисом.

В целом диагностику всегда проводят комплексно, не пользуясь только лишь 1 видом обследования, а комбинируя различные дополняющие друг друга методы.

Задайте свой вопрос врачу клинической лабораторной диагностики

Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).Задать вопрос>>

Небольшим минусом или, скорее, особенностью анализа является его чувствительность даже после излечения болезни. Результат держится положительным в течение всей жизни переболевшего сифилисом человека.

При любом положительном результате существует подозрение на заражение инфекцией. Но периодически может случаться проявление ложноположительной реакции. Правда, её количественное присутствие обычно не превышает 3% и обуславливается рядом причин неинфекционного характера.

Посмотрите видео на эту тему

ПОДРОБНЕЕ:  Код МКБ A50 | Врожденный сифилис

Ни одна из методик не даёт 100% гарантии точного результата. Отклонения в отдельных случаях могут доходить до 10%.

Серологический анализ – включает в себя неспецифические и специфические тесты.

Подобный вид анализа полезен при недостаточной симптоматике или при её отсутствии.

Неспецифические тесты – это:

  • микрореакция преципитации – используется по истечению одного месяца после заражения;
  • реакция Вассермана – используется по истечению 6 недель после начала инфицирования.

Для обоих видов забирается кровь из пальца, спинномозговая жидкость.

Специфические тесты – это:

  • реакция иммунофлюоресценции – подходит для ранних стадий заболевания, в качестве материала используется капиллярная кровь или из вены;
  • иммуноферментный анализ – один из самых точных видов анализа, используется после выполнения неспецифических тестов либо в качестве комплексной диагностики;
  • реакция иммобилизации бледных трепонем – ещё один распространённый и точный анализ, применяется только спустя 4 месяца после заражения, материал забирается из вены;
  • иммуноблотинг – является новым методом, используемым для подтверждения результатов других анализов, очень точен, но обладает высокой стоимостью.

Лабораторный анализ – быстрый и относительно недорогой метод исследования. В качестве материала используются пробы язв и эрозий, грудное молоко, сперма.

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

количественный РПГА на сифилис

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Темнопольная микроскопия как метод визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале

Рисунок 2 — Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации — CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

Как проводиться обследование?

Распознавание сифилиса проводиться в два этапа начиная с обследования больного, заканчивая изучением крови на антитела.

Доктор осматривает пациента, при этом уже определяет вероятность присутствия болезни:

  • обнаружение язв на половых органах либо в оральной полости;
  • дерматологические высыпания, уплотнения;
  • облысение в области головы.

Врач уточняет информацию у пациента, опираясь на вопросы о присутствии подозрительных половых актов или лечение венерической болезни.

Кровь забирается обычным способом из вены.

Далее медработник смешивает забранный материал с реактивом в стерильной пробирке. Смесь направляется на перемешивание, которое длится около часа.

В случае выпадения осадка эритроцитов результат определяется как положительный.

РПГА применяется не только для обнаружения возбудителей сифилиса. Зачастую анализ применяется для обнаружения патологий кишечного характера.

Так же метод хорош для выявления дифтерийной инфекции и оценки иммунитета после проведённой вакцинации. В данном случае антитела начинают свою активность уже на следующий день после заражения, что значительно ускоряет возможность проведения анализа. По точности и чувствительности метод проведения РПГА обходит даже бактериологический метод.

Анализ крови на РПГА часто применяется и для обнаружения бактериальной дизентерии. При этом его показательность намного выше, нежели у метода лабораторной диагностики посредством бактериального посева.

Плюсом такого исследования является дополнительная возможность определения фазы приходящей диареи, в том числе острой и хронической. Так же анализ позволяет отличить шигеллез от нарушений эндокринной системы, колоректального рака и воспалительных процессов в толстой кишке.

При использовании коревого маркера можно обнаружить развитие кори у потенциального больного.

Показания

Несмотря на то, что главным показанием к проведению анализа является подозрение на заражение сифилисом, причин для назначения анализа на самом деле больше.

Среди них можно выделить:

  • выявление признаков заражения основным возбудителем и общая неблагоприятная клиническая картина больного;
  • при увеличении лимфоузлов на фоне появления высыпаний в виде язв;
  • также обследоваться должны родственники и близкие люди, находящиеся в близком контакте с заразившимся, переболевшим или обладающего признаками заражения человеком;
  • обследованию подлежат люди, желающие стать донорами крови;
  • анализ крови РПГА обязателен перед проведением хирургического вмешательства;
  • возможно назначение анализа при годовом профилактическом обследовании;
  • обязательно его проведение оформлении санкнижки;
  • в случае предположения о развитии некоторых других заболеваний — кори, дифтерии, сальмонеллёза, столбняка, коклюша.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

Четыре стадии заболевания и их характеристика

По причине высокой точности анализа повлиять на него могут некоторые факторы, не всегда относящиеся к заболеванию сифилисом.

Среди них:

  • инфицирование другими видами возбудителей – туберкулёз, мононуклеоз;
  • беременность;
  • заблаговременный приём антибиотиков или начало антибиотикотерапии;
  • заболевания онкологического характера;
  • аутоиммунные аномалии;
  • если ранее пациент имел заражение сифилисом, но прошёл успешную терапию (после первичного заражения результат РПГА носит положительный характер пожизненно).

Определение венерического заболевания проводиться методом изучения крови на наличие трепонемы.

Данный метод распознавания сифилиса при помощи серологической реакции самый распространенный из числа многих тестов.

ПОДРОБНЕЕ:  Сифилис anti tr pallidum igg igm

Иммунолог создал особую систему характеристики заболевания, при которой кресты указывают на количество антител. Важно знать, что в самом заболевании их нет, а присутствуют трепонемы, язвы, сифилитическая сыпь.

Возрастание титра антител говорит об активном размножении возбудителя, а кресты содержатся в любом анализе с положительной оценкой присутствия антител. Рассмотрим стадии болезни и их особенности.

Сифилис один крест

Если есть кресты, сифилис положительный, однако существуют сомнения даже при наблюдении антител в крови для борьбы с болезнью.

Поэтому врачи называют такой результат теста сомнительным. Часто результат теста может означать другое заболевание.

Результат 1 означает, что с этапа инфицирования прошло мало времени. Плюс может присутствовать после проведения полного лечения, когда сохранились антитела.

Сифилис два креста

Два креста означают положительный результат, который говорит о наличии трепонемы в крови.

Возрастание титра свидетельствует о небольшой концентрации в крови. Так, нужно исследовать бактерию для утверждения заключения 2 плюса перед началом терапии.

Сифилис три креста

Анализ крови с оценкой три креста свидетельствует о положительном результате и не поддаются опровержению. Повторное изучение крови только подтверждает диагноз 3 креста, что характерно для заболевания на II этапе развития.

Самое неблагоприятное заключение результат 4 креста. Но это совсем не означает, что заболевание невозможно вылечить.

Для данного этапа характерна приметная сыпь, выпадение волос, повышение температуры тела. Численность антител на высоком уровне, поэтому заключение не поддается сомнениям.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

  1. 1Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. 2Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. 3Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. 4Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

  1. 1Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. 2Получение быстрого ответа;
  3. 3Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. 1Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. 2Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. 3Злокачественные новообразования.
  4. 4Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. 5Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. 6Беременность.
  7. 7Употребление алкоголя.
  8. 8Приём жирной пищи.
  9. 9Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно  причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

РСКт — Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (Реакция Вассермана)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

Расшифровка

Расшифровка анализа крови РПГА, равно как и само проведение исследования выполняется специалистами и медработниками, самостоятельно расшифровать данные титров у непосвящённого человека не получится.

Обычно количественное соотношение свыше 1:640 говорит о развитии инфекции в активной стадии, значение более низкого характера, 1:320, указывает на первичное заражение инфекцией.

Так же проводится аналитическая процедура, в ходе которой на дне лунок микропланшета образуется разного рода скопление материала. Если эритроциты образуют ровный слой, напоминающий зонт, это говорит об утвердительной реакции на сифилис.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Реакция микропреципитации (схема)

Рисунок 2 — Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

Ложноположительные результаты

Главным образом это означает развитие в организме сифилисной инфекции. Но не всегда утвердительный результат говорит только лишь об инфекции.

Среди причин могут быть:

  • беременность;
  • гепатиты видов В и С;
  • инфаркт в острой форме;
  • сифилис во вторичной, третичной или скрытой фазах;
  • наличие в организме ВИЧ-инфекции;
  • употребление наркотиков в виде инъекций;
  • патологии соединительной ткани;
  • лептоспироз;
  • новообразования злокачественного характера;
  • клещевой боррелиоз;
  • тиф возвратного типа;
  • географические варианты эндемического сифилиса;
  • воспалительные процессы на фоне сифилиса;
  • туберкулёз;
  • бактериальный эндокардит;
  • травмы обширного характера и переломы;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • реакция после проведённой вакцины.

Выход в случае обнаружения положительного результата один – в срочном порядке нужно обратиться к врачу.

Медикаментозное лечение подразумевает применение разного спектра антибиотиков – пенициллина, эритромицина или тетрациклина. В тяжёлых случаях добавляют пиротерапию, в ходе которой искусственным образом повышают температуру тела больного, и внутримышечные инъекции антибактериальных препаратов.

Лечение проходит как сам заразившийся, так и его близкие родственники и люди, имевшие с больным в недавнем времени контакты различного характера.

Вся домашняя мебель, утварь и предметы личного плана проходят дезинфекцию.

Причинами появления неопределённого или ложноположительного результата могут быть следующие параметры:

  1. Беременность;
  2. Наличие менструации на момент проведения анализа;
  3. Начальный период после проведения вакцинации;
  4. Недавно перенесённый инфаркт миокарда;
  5. Недавно перенесённые или ныне развивающиеся заболевания инфекционного характера (ВИЧ-инфекция, грипп, оспа, гепатит, респираторные инфекции);
  6. Онко- и аутоиммунные заболевания;
  7. Патологии печени, почек и других внутренних органов.
  1. отличие сифилиса от герпеса
  2. пиобактериофаг кандида
  3. пятна на голове болят
  4. экзодерил капли в ухо
  5. перечень таблеток от аллергии
  6. гийена барре
  7. болит голова в полнолуние
Adblock
detector